GEHealthcare注重创新,促进技术和产品的不断发展。积极鼓励员工提出新的想法和解决方案,并鼓励员工在工作中不断追求创新,从而推动医疗行业的进步。
因此,大分子比小分子更早地离开色谱柱,这使得分子的停留时间与色谱柱的大小相关联成为可能。近年来,该分离方法已被应用于从复杂的生物媒介中分离纯化囊泡。
美国。根据查询世联博研网显示,gehealthcare品牌的凝胶色谱柱是美国的。凝胶柱色谱也称为凝胶过滤色谱、分子筛色谱、凝胶渗透色谱、排阻色谱,主要是利用凝胶网状结构的分子筛作用,根据被分离物分子大小不同进行分离。
1、凝胶在装柱前,可用水浮选法去除凝胶中的单体、粉末及杂质,并可用真空泵抽气排出凝胶中的气泡。购买商品中的玻璃或有机玻璃的凝胶空柱,在柱的两端皆有平整的筛网或筛板。
2、避免重复使用密封垫,每次更换新的密封垫。使用合适的工具(如陶瓷片或金刚石切割器)进行柱切割。在安装前确保色谱柱头清洁平整,并没有明显损坏或污渍。
3、注意色谱柱内不能有气泡存在,一旦发现有气泡,必须重装。
由于凝胶的分离是靠筛分作用,所以凝胶的填充要求很高,必须要使整个填充柱非常均匀,否则必须重填。凝胶在装柱前,可用水浮选法去除凝胶中的单体、粉末及杂质,并可用真空泵抽气排出凝胶中的气泡。
隔绝空气:液封可以隔绝空气,并防止凝胶表面氧化和脱水。过多的氧化和脱水可能会影响凝胶的生长和干燥,而液封的存在可以防止这种情况的发生。
加一层水称为水封\x0d\x0a目的是隔绝空气使催化反应快速进行,进而形成凝胶,还可使分离胶上沿平直。\x0d\x0a并且加水后,保持分离胶表面的平整性,使浓缩胶和分离胶都处于同一水平面上。
(2)装柱凝胶层析柱的直径与柱长之比一般为1:15 (3)加样装好的色谱柱至少要用相当于3倍保留体积的洗脱剂平衡。
(一)凝胶层析法 凝胶层析又称分子筛过滤、排阻层析等。它的突出优点是层析所用的凝胶属于惰性载体,不带电荷,吸附力弱,操作条件比较温和,可在相当广的温度范围下进行,不需要有机溶剂,并且对分离成分理化性质的保持有独到之处。
此外,直径加大,洗脱液体体积增大,样品稀释度大。分离度取决于柱高,为分离不同组分,凝胶柱床必须有适宜的高度,分离度与柱高的平方根相关,但由于软凝胶柱过高挤压变形阻塞,一般不超过1米。
1、可按以下流程冲洗:先用10%乙腈或甲醇水,反冲20min。再换上纯甲醇,反冲20min。然后再换异丙醇:二氯甲烷(25:75),反冲120min。
2、如果系统里面是流动相,不可以直接冲甲醇、乙腈等纯有机相,需要用10%的甲醇(乙腈)水缓冲。也是防止盐析出。色谱柱也是一样的意思。一般来说250mm*6mm的色谱柱,0ml/min至少冲洗30min,最好40min。
3、未使用缓冲盐:每天分析完成后,用纯甲醇或纯乙腈反向冲洗色谱柱60min。 使用过缓冲盐:分析完成后,先用上述方法除去缓冲盐,然后再用纯甲醇或乙腈反向冲洗色谱柱 60min。
4、如果样品中有盐的话,最好还是用(水:乙腈= 9:1)先冲洗一下,如果柱子里盐不冲洗干净的话,再用小极性的流动相冲柱子时,盐就会析出,影响色谱柱寿命。
5、在进行彻底冲洗时,建议使用等体积的纯乙腈或纯甲醇,缓慢地将溶液流过柱子,直到出现干净的基线。除了以上两种方法外,还有一些小技巧可以帮助延长C18色谱柱的使用寿命。
色谱柱的选择 可根据待分析样品的极性、分子量大小、是否可溶于水等因素来考虑。如样品分子量大于2000的,可溶于水的,可选择凝胶色谱柱、大孔径反相色谱柱、大孔径离子交换色谱柱。
判断色谱柱柱效下降可以通过以下几个途径:看峰分离度怎么样,分离度直接关系测试结果准确性,可以判断柱效是否下降,柱效下降分离度一般会变差。
不同的色谱柱有不同的测试方法,来自不同厂家的同类色谱柱也往往采用不同的测试条件,所以最好按照色谱柱说明书中的测试报告测定柱效。
1、当一切都准备好后,这时可打开色谱柱的活塞,让流动相与凝胶床刚好平行,关闭出口。用滴管吸取样本溶液沿柱壁轻轻地加入到色谱柱中,打开流出口,使样本液渗入凝胶床内。
2、用的是什么色谱柱?普通的反相柱吗?如果是没有缓冲盐的话(比如只是甲醇水,或者乙腈水),没有关系,早上来用纯甲醇冲一下就OK。如果流动相有缓冲盐的话,流动相的停滞肯定会照成压力上升,这是缓冲盐析出造成的。
3、通常,越是分辨率高的细颗粒凝胶对于装柱的技术要求越高。柱效:柱效简而言之就是色谱柱对色谱中两种物质分离能力的大小。柱效越高,分离效果越好,峰形越好,反之则分离效果差,峰形差,甚至不能完全分开两个物质。